一、費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌實驗流程
二、實驗安排
第1次 菌體超聲破壁、離心、包涵體復(fù)性、 裝離子交換柱
第2次 測酶活、定蛋白離子交換層析 層析樣品進(jìn)行濃縮、透析
第3次 濃縮、透析前、后樣品測活、定蛋白 裝分子篩柱
第4次 分子篩層析，并對收集樣品進(jìn)行測活、定蛋白等
第5次 對分離純化各樣品進(jìn)行蛋白電泳分析，并繪出分離純化表
三、實驗操作
第1次： 菌體超聲破壁、離心、包涵體復(fù)性、裝離子交換柱
實驗順序：超聲破壁→離心→裝離子交換柱→平衡→包涵體復(fù)性
掌握要點：破壁原理
裝離子交換柱方法
包涵體復(fù)性原理及方法
第2 次：測酶活、定蛋白、 離子交換層析分析 、 層析樣品進(jìn)行濃縮、透析
實驗順序：測酶活→上柱→梯度洗脫→定蛋白→紫外吸收測蛋白峰→酶活曲線測定→收集樣品→ 濃縮 →透析
涉及單元實驗：測酶活、定蛋白、 離子交換層析、濃縮、透析
掌握要點：堿性磷酸單酯酶測活原理
紫外吸收法繪蛋白濃度曲線方法
離子交換層析原理及方法
濃縮及透析常用方法
第3次：濃縮、透析前、后樣品測活、定蛋白、裝分子篩柱
實驗順序：濃縮透析前、后樣品測活→考馬斯亮藍(lán)法定蛋白→裝分子篩柱→平衡
涉及單元實驗：測活、定蛋白、裝分子篩柱
掌握要點：考馬斯亮藍(lán)法測蛋白濃度方法
費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌裝分子篩柱方法
第4次：分子篩層析，并對收集樣品進(jìn)行分析
實驗順序：測活樣品進(jìn)行分子篩層析→紫外吸收測蛋白峰--酶活曲線測定→考馬斯亮藍(lán)法定蛋白
涉及單元實驗：破壁、離心、分子篩層析、復(fù)性
掌握要點：分子篩層析原理
對分離純化各樣品計算比活
第5次：對分離純化各樣品進(jìn)行蛋白電泳分析， 并繪出分離純化表
實驗順序：蛋白電泳，同時進(jìn)行數(shù)據(jù)分析
涉及單元實驗：蛋白電泳
掌握要點：掌握蛋白電泳方法
了解分離純化樣品純度鑒定的各種方法
繪制酶的分離純化表
費(fèi)氏弧菌發(fā)光桿菌
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