感覺(jué)態(tài)細(xì)胞在基因工程實(shí)驗(yàn)中，經(jīng)常要使用各種感受態(tài)細(xì)胞進(jìn)行DNA的轉(zhuǎn)化操作。轉(zhuǎn)化指同源、異源的“裸露”的DNA分子被感受態(tài)細(xì)胞攝取并得到表達(dá)的基因水平轉(zhuǎn)移過(guò)程。感受態(tài)細(xì)胞的制備是分子生物學(xué)研究中的一個(gè)重要環(huán)節(jié)，其制備質(zhì)量的好壞直接影響到后續(xù)實(shí)驗(yàn)工作的進(jìn)行。
感覺(jué)態(tài)細(xì)胞的熱激與轉(zhuǎn)化：
所謂轉(zhuǎn)化，即重組DNA分子體外構(gòu)建完成后，導(dǎo)入感受態(tài)細(xì)胞，使之無(wú)性繁殖并高效表達(dá)外源基因或直接改變其遺傳性狀的過(guò)程。轉(zhuǎn)化中常用的DNA類(lèi)型是質(zhì)粒。
冰上融化后，取50ul感受態(tài)，加入目的DNA（一般是質(zhì)粒），輕輕混勻。然后將細(xì)胞和質(zhì)粒的混合物在冰上放置30分鐘。
42℃水浴中熱激45秒（不同的感受態(tài)菌株熱激時(shí)間不一樣，即使同一感受態(tài)不同的有的熱激時(shí)間也不相同，所以要嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)上的熱激時(shí)間?。?/div>
然后快速將管轉(zhuǎn)移到冰浴中2分鐘，該過(guò)程不要搖動(dòng)離心管。然后向每個(gè)離心管中加入無(wú)菌的SOC或LB培養(yǎng)基，混勻后置于37℃，200rpm培養(yǎng)1小時(shí)，使細(xì)菌復(fù)蘇。
根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求（質(zhì)粒，重組連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化），吸取不同體積已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞加到含相應(yīng)抗生素的LB瓊脂培養(yǎng)基上，將細(xì)胞均勻涂開(kāi)。將平板置于37℃至液體被吸收，倒置平板，37℃過(guò)夜培養(yǎng)。第二天，被質(zhì)粒轉(zhuǎn)化過(guò)的細(xì)菌將會(huì)形成菌落。接下來(lái)，計(jì)數(shù)菌落數(shù)目來(lái)計(jì)算轉(zhuǎn)化效率，它是成功轉(zhuǎn)化菌落的數(shù)目除以總DNA的量得到的數(shù)值。
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