PCR檢測(cè)試劑盒采用一步法實(shí)時(shí)熒光反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(One-StepRealTimeRT-PCR)，結(jié)合Taqman技術(shù)，對(duì)特異核酸進(jìn)行定性或定量檢測(cè)。用于對(duì)AIV進(jìn)行檢測(cè)，有助于對(duì)AIV的實(shí)驗(yàn)室診斷、監(jiān)測(cè)和流行病調(diào)查。
結(jié)果成立原則
陽(yáng)性對(duì)照：CT值＜30并有明顯的擴(kuò)增曲線(xiàn)。
陰性對(duì)照：無(wú)CT值或者CT值>37，線(xiàn)性為直線(xiàn)或者輕微斜線(xiàn)，無(wú)明顯擴(kuò)增曲線(xiàn)。
以上要求需同時(shí)滿(mǎn)足，否則本次實(shí)驗(yàn)無(wú)效，需要重新進(jìn)行。
PCR檢測(cè)試劑盒在整個(gè)檢測(cè)過(guò)程中的注意事項(xiàng)：
1.整個(gè)檢測(cè)過(guò)程應(yīng)嚴(yán)格按照本說(shuō)明書(shū)要求分別在試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴(kuò)增區(qū)進(jìn)行操作，各區(qū)實(shí)驗(yàn)服、儀器、耗材應(yīng)獨(dú)立使用，不能混用；實(shí)驗(yàn)用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進(jìn)行操作；三個(gè)區(qū)應(yīng)該配有紫外線(xiàn)殺菌裝置。
2.為避免RNA降解，樣本處理過(guò)程應(yīng)在0-4℃條件下操作，且完成實(shí)驗(yàn)后立即上機(jī)檢測(cè)；樣本處理過(guò)程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過(guò)無(wú)核酶處理。
3.每次實(shí)驗(yàn)應(yīng)該設(shè)置陰、陽(yáng)性對(duì)照。
4.試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻，并應(yīng)瞬時(shí)離心。
5.試劑盒內(nèi)所配陰性和陽(yáng)性對(duì)照在使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準(zhǔn)備區(qū)，并單獨(dú)存放。
6.為防止熒光干擾，應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管，并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進(jìn)行任何標(biāo)記。
7.儀器擴(kuò)增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說(shuō)明書(shū)相關(guān)要求進(jìn)行設(shè)置；不同批號(hào)試劑不能混用。
8.ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。
9.實(shí)驗(yàn)過(guò)程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進(jìn)行無(wú)害化處理后方可丟棄。
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